QUANTAL COMPONENTS OF THE END-PLATE POTENTIAL (1954)
В современных вычислительной биологии модели зачастую идут параллельно с реальностью и не проверяются экспериментально должным образом: модель считается самодостаточным результатом. Данная работа, ставшая уже классической (>2000 цитат), демонстрирует то, как моделирование и эксперимент могут дополнять друг друга, в результате позволяя ответить на фундаментальные вопросы.
Del Castillo и Bernard Katz (нобелевский лауреат 1970-го) экспериментировали на лягушках, записывая токи с концевых мышечных пластинок и заметили, что если мотонейрон, аксон которого образовывал синапс с концевой пластинкой мышцы, спайковал, заливая всё ацетилхолином, то на пластинке регистрировался сильный деполяризующий отклик — потенциал концевой пластинки (end-plate potential или EPP) амплитудой в 20 mV (заряд смещался с -75mV до -55mV), однако, даже в отсутствии спайка на аксоне мотонейрона, на концевой пластинке регистрировались слабые потенциалы в 0.5 mV, которые было решено назвать миниатюрными потенциалами концевой пластинки (miniature end-plate potential или mEPP). Было предположено, что EPP = сумма большого числа mEPP случившихся в коротком временном интервале, где каждый mEPP – ответ на некоторый квант ацетилхолина, высвобождаемого пресинапсом. Стоит понимать, что про везикулы и синаптическую передачу тогда ничего толком не знали, поэтому квант – по факту одна условная везикула, случайно или неслучайно излившая содержимое в синаптическую щель. Тогда усредненная амплитуда EPP должна быть равна: V_e = npq, где n – число доступных квантов ацетилхолина в пресинапсе, а p – средняя вероятность высвобождения кванта (везикулы) в синаптическую щель, а q – амплитуда mEPP (в оригинале quantal amplitude). Собственно, вся статья 1954-го года посвящена проверке этой модели экспериментально. С этой целью ученые искусственно варьировали синаптическую проводимость, понижая концентрацию кальция (который нужен для высвобождения везикул, как мы сейчас знаем) и повышая магния, тем самым получив ответный EPP на спайк моторного нейрона амплитудой всего в несколько mV – несколько квантов или mEPP в рамках гипотезы. Если предложенная модель корректна, тогда среднее количество везикул-квантов высвобождаемых за каждый EPP должно быть равно m=np. При этом, условно зная (провидение), что число n везикул в пресинапсе большое, а вероятность экзоцитоза p маленькая, они предположили, что число везикул высвобождаемых в синаптическую щель должно аппроксимироваться Пуассоновским распределением, таким образом вероятность высвобождения x везикул-квантов в конкретном испытании равна P(x) = (m^x / x!) exp(-m). Это даёт два возможных способа получения числа m. Во-первых, это средняя амплитуда регистрируемого EPP, деленного на амплитуду q или mEPP. Во-вторых, экспериментальные условия приводили к тому, что регистрировалось множество нулевых EPP – когда никакого отклика на стимуляцию моторного нейрона в концевой пластинке не регистрировалось вследствие крайне малого значения p, что аналогично P(0) = exp(-m), а P(0) экспериментально можно получить как отношения числа неудач к общему числу испытаний. Если модель корректна, тогда оба этих пути оценки числа m должны давать идентичный результат m = mean(V_EPP)/q = ln(число испытаний/число неудач). Собственно, собрав данные они это и увидели. Такой квантовый анализ до сих пор используется в экспериментальной науке для анализа синаптических ответов, например, для локализации пре- и постсинаптических изменений связанных с LTP и LTD. И да, результаты этой работы во многом легли в основу современного знания о ВПСП и ТПСП в ЦНС, сама природа mEPP как бы намекает на сущностное родство.