Cyber Dacha

Помогаю семенам запуститься Прошло 10 недель, как я закинул в стерильные условия семена, а они всё не всходят. Вроде, и стратификацию проводил и сами семечки хорошо выглядят. Пока не понимаю до конца, от чего зависит всхожесть. Решил помочь семенам. Читал, что в стерильных условиях помогает снятие кожуры. Расчехлил микроскоп и сделал. Под кожурой семена выглядят вполне живыми. У меня было два вида семян. Названия сортов не знаю. Один я называю японский Высокий, а другой - японский Низкий. Первые семена от скрещивания Высокий х Высокий (ВВ), а вторые - Высокий х Низкий (ВН). Низкий имеет у основания значительно больше фиолетовых вкраплений. И вот интересно, что все семена ВВ внутри были белого цвета, а среди семян ВН попадались как белые, так и фиолетовые.

Первый эксперимент по образованию корней Ещё на шаг ближе к микроклональной рассаде васаби! Выполнил песесадку, сменил гормональный состав среды, чтобы микропобеги пустили корни.

Почему проект «Потато» или возвращение аэропоники Расскажу немного вам о семенном картофеле, ребята. Оказывается, что промышленный мир выращивания картошки несколько отличается от того, к чему мы привыкли на даче. В первую очередь в промышленном мире всё завязано на качестве. Тут, как и с васаби, не получится подолгу размножать одну и ту же линию. Т.е. если осенью собрать картофель и часть оставить на следующую посадку на весну, то много циклов так не сделаешь, если хочется иметь здоровый урожай, т.к. с каждым циклом у растения накапливаются болезни. Несколько циклов провести возможно, но периодически посадочный материал требуется обновлять. И оказывается, семенной картофель проходит не один этап, прежде чем попадает к обычным фермерам. Здоровый картофель в наше время начинается с пробирки. Существуют специальные семенные фонды, которые в in vitro поддерживают здоровый, безвирусный, чистый от всяких заболеваний материал с известными характеристиками. Из материала in vitro выращивают так называемые мини-клубни, маленькие картофелины - суперчистые и здоровые семена. Выращиваются они при повышенном санитарном контроле. В качестве одного из подходов к выращиванию применяется аэропоника (тут я подмигиваю). Мини-клубни не используют для товарного производства, а переводят на следующий этап. Дальше идет Первое полевое поколение - первый картофель, выращенный в поле. К нему также применяются повышенные требования к условиям выращивания и здоровью. Но и это ещё не конечный семенной продукт. Следующее поколение называется Супер-суперэлита, за ним идет еще одно поколение Суперэлита, а после него еще одно поколение - Элита. Именно Элита попадает к фермерам как здоровый посадочный материал. После нее идут репродукции, первая, вторая и т.д., урожай с которых накапливает вирусы и снижает урожайность. Т.е. до получения Элиты проходит 5 лет, и из одного мини-клубня получатся тысячи, десятки тысяч картофелин. Мини-клубни стоят значительно дороже обычной картошки, но и требования к ним очень высокие. Так вот, у меня сейчас чудесным образом есть две компетенции - я набил руку в микроклональном размножении и собаку съел на аэропонике, что позволяет мне покрыть первый и второй этапы в цепочке производства семенного картофеля. Поэтому я решил попробовать вырастить мини-клубни на аэропонике. Попробую, поиграюсь, а дальше видно будет. Аэропоника из бэк!

Собрал. Дел на пол часа. Фильтр поставил внутри, чтобы было просто обслуживать. Склею потом на него какой-нибудь кожух из пенопласта, а то вангую, на нем будет больше всего конденсата.

Климат для васаби Температура уличного воздуха опустилась достаточно, чтобы охлаждать помещение вместо кондиционера. Временно собрал на коленке приток воздуха, но буду переделывать. Точно надо поставить на входе сетку, чтобы мухи не перемалывались вентилятором. Точно надо поставить фильтр, чтобы не собирать с улицы пыль и прочие частицы. Точно надо будет сделать теплоизоляцию, чтобы конденсат не капал, когда на улице станет еще холоднее.

Микроклональное размножение васаби Пересадил в очередной раз экспланты васаби. Размножение идет стабильно. В микроклональном размножении обычно процесс делится на несколько этапов. • Сначала экспланты вводят в стерильную культуру. Это делать я научился. • Потом идет этап мультипликации. Гормональный состав способствует образованию микропобегов, которые можно периодически разделять, чтобы получить больше растений. Пока считаю, что минимального качества на этапе мультипликации я достиг. • Дальше идет этап образования корней. Для этого микропобеги пересаживают на другой состав гормонов, способствующий их образованию. А может корни удастся получить и без гормонов вовсе. Через несколько недель планирую приступить к экспериментам по этой части. • Потом микропобеги с корнями сажают в нормальный субстрат и производят адаптацию от стерильных условий к жизни в обычном мире. Как только научусь получать корни, буду учиться адаптировать растения. Так что до реальной рассады in vitro еще много работы, но всё выглядит осуществимым. P.S. На фото можно наблюдать, как из куска ткани в разные стороны растет три микропобега.

Проект Иван Александрович У меня родился сын. Так что теперь надо учиться в сутках укладывать ещё больше часов.

Проект «Потато» Пока эксперименты с васаби идут своим чередом, я решил поиграться с культурой, которая является его полной противоположностью по распространенности. Буду размножать в in vitro картофель. Пока ничего серьезного, просто попробую. Самый первый пробник купил во ВкусВилле, потому что там можно посмотреть сертификат качества и, если повезет, узнать сорт. Мне попалась Ривьера. Сегодня сделал пробную высадку в стерильных условиях. Так что погнали! Люблю картошку!

Решил дать эксплантам васаби немного подрасти. Прошлые пересадки осуществлялись, как только на эксплантах появлялись новые отростки. Хочу сместить цикл на 4 недели, чтобы не рассаживать микроскопические кусочки. Поэтому на прошлой неделе сделал пересадку без разделения. Использовал дышащие мембраны и прошлого поста. Теперь банки не потеют, заражения тоже не видно

Когда лень склеить нормальный таймлапс

Климатом теперь я доволен. Васаби, при!

Собрал увлажнитель Надоело мне каждый день заливать воду в увлажнитель, решил собрать свой с баком побольше. Два УЗ-испарителя приделал к пенопластовому плоту и прикрутил кулер к ящику на вдув воздуха — вот и вся конструкция. Питание повесил на умную розетку, чтобы по датчику влажности у васаби срабатывало. Попозже ещё трубу приделаю к месту выдува и добавлю фильтр на кулер, чтобы пыль собирал. Теперь можно пополнять раз в 7-10 дней.

Потеющие банки с эксплантами Недавно заметил в лабе одну особенность: на нижней полке банки не потеют, а на остальных — потеют. Очень похоже, что дело в освещении. Светодиодные линейки я клеил непосредственно к обратной стороне металлических полок. Освещение хоть и слабое, но сегодня сделал замеры, и оказалось, что поверхность с приклеенными световыми линейками в среднем на 1.5 градуса теплее, чем нижняя полка, к которой ничего не приклеено. Под рукой оказались толстые листы пенопласта, их и применил.

Дышащие мембраны для банок с эксплантами Мне в комментариях подсказали про существование интересных штучек — фильтров - наклеек. Такой фильтр имеет поры не более 0,2 мкм, что позволяет не пропускать грибы и бактерии, в то же время улучшается газообмен. Ещё такой фильтр не должен выпускать влагу, т.к. состоит из гидрофобного материала PTFE, так что среда не будет высыхать. В первую очередь надо провести испытания. Наклеил на мелкие пластиковые банки и поставил автоклавироваться. Очень важно, чтобы выдержало и ничего не отклеилось. Автоклавировал 30 мин, 121°C, 1.5 бар. Никаких проблем, ни намёка на отслоение. Ещё я читал, что такие банки меньше потеют за счёт более эффективного выравнивания температуры внутри и снаружи. Но это стоит проверить. Мне кажется, что будет одинаково, т.к. если внутри влажность выше и влага никуда не девается, то и с точкой росы ничего не происходит. Проверяю. Я ошибся. На последней фотке видно, что капли на крышке уходят. Прошло около 15 часов от заливки. Пока все идёт к тому, что запотевание совсем уйдёт. Главное теперь, чтобы среда не начала быстро согнуть. Понаблюдаю. В общем, покупкой я доволен, буду пробовать в бою.

Е77 готов Вот и закончена работа на сегодня. Вернулся где-то к 23 часам. И так почти каждую субботу. Раскидал 100 семян. На фотках внимательные могут заметить буквы ВВ и ВН. Это у меня опыление растений между разными сортами. Один я называю Высоким, а второй — Низким. Настоящие названия сортов мне неизвестны, хотя есть основания полагать, что оба из ветки Mazuma. Так вот, ВВ — это опыление Высого Высоким, а ВН — Высокого Низким. Не то чтобы я тут какой-то селекцией занялся. Просто семян ВВ оказалось только 50, а мне для достоверности результатов эксперимента хотелось побольше данных собрать, поэтому докинул ещё 50 ВН. А проверяю я в этом эксперименте следующие гипотезы: После высадки на среду семена имеет смысл отправить в холодильник ещё на 10 дней, т.к. стратифицировал я их не в супервлажном состоянии. Японцы обычно оставляют семена на пару месяцев под холодной проточной водой. У меня такой возможности нет. А если просто оставить нежные семена на такой длительный срок во влаге, то они к концу срока истлеют. Поэтому есть основание полагать, что нахождение уже в стерильных условиях во влаге и в прохладе даст лучший процент всхожести. Сравниваю разную тару для проращивания в стерильных условиях: обычные соусники на 30 мл, планшет на 24 небольших лунки, зип-пакет с воздушным фильтром, стеклянная чашка Петри.

Сколько времени занимают подобные эксперименты? Обычно я стартую все приготовления где-то в 12-13 часов дня и возвращаюсь домой из лабы в 20-24 часа, в зависимости от трудоёмкости процесса. Если надо ковырять меристему под микроскопом, а эксплантов я набрал целую кучу, то процесс может затянуться, а если просто пересадить экспланты на свежую среду, то гораздо быстрее.

Как проходят мои эксперименты с in-vitro Сегодня суббота, а это значит, что я еду в свою лабу ставить очередной эксперимент. Почти все семена васаби я распродал, но и себе немного оставил. Пришла пора их высадить в стерильных условиях. Все приготовления, которые можно сделать без стерильных условий я произвожу дома, попивая кофеёк: мою посуду, готовлю среду, автоклавирую всякое, подготавливаю экспланты и пр. Потом собираю всё в сумки и еду к ламинару, который находится в бытовке в Путилково. Список дел при приготовлении обычно довольно большой, поэтому, чтобы ничего не забыть, я разбиваю его на тудушки. А т.к. работа по большей части шаблонная, то очень удобно копировать тудушки с прошлого эксперимента и вносить правки под текущий эксперимент. По каждому эксперименту я веду журнал, что именно планирую сделать. А по итогам записываю, что получилось. Вот так, например, выглядит сегодняшний день (это копипаста из моего блокнота, решил ничего не править):

### E77 15.08.26 Сажаем семена, собранные с сорта васаби из трубы, который я считаю высоким. Опылял это растение от другого, которое тоже называю высоким. Семена были в закрытом соуснике в нулевой зоне холодильника около двух месяцев. Семена в собственной шелухе. Дополнительно не увлажнял. Сажаю в 4 тары: петри 70 мм, соусник 30 мл, зип-пакет с вентиляцией, планшет на 24 лунки Среда: 1/2 MS, 100% витаминов, сахар 10 г/л, без гормонов - После высадки отправляю снова в холодильник на 10 суток в нулевой зоне, - затем плавно поднимаю до максимума холодильника еще на 7 дней - Затем переношу в коридор, где температура 20 градусов

E77 — это порядковый номер эксперимента. Это значит, что до этого я провёл уже 76 экспериментов. Если происходит пересадка эксплантов внутри эксперимента, то к числу добавляется суффикс. Например, когда я пересажу Е77 на свежую среду, то будет E77.1 А вот так выглядит список дел для E77. Тоже копипаста из блокнота, т.е. список чисто для себя. Многие очевидные мне вещи тут опущены, некоторые, возможно вам будут непонятны, но цель расписывать весь процесс я перед собой тут не ставлю — это достойно отдельной статьи.

### E77 15.08.26 - [ ] Помыть колбы и все петри - [ ] Стерилизация петри в духовке - [ ] Помыть автоклав - [ ] Залить воду. 4 банки + 1 банка 110 мл - [ ] Автоклав 1 - [ ] Вода 4 банки - [ ] 1 банка с водой для цефотаксима - [ ] 1 банка для гипохлорана 110 мл - [ ] 1 банка побольше, куда вылью среду для лунок в планшете - [ ] Запустить стерилизацию лабы + сухожар - [ ] Почистить семена - [ ] Калибровка pH-метра + предварительно отмыть от грязи - [ ] Приготовить среду - [ ] Дюшефу 0.66 л - [ ] Сахар 6.6 (10 г/л) г - [ ] Гельрит 1.45 г (2.2 г/л) - [ ] Смесь MS 1.45 г (2.2 г/л) - [ ] Вит 33 мг (50 мг/л) - [ ] MES 0.33 (0.5 г/л) - [ ] KOH До кипячения доводим до pH 6.0 - [ ] Проветривание лабы запустить - [ ] Автоклав 2 - 20 мин, 121 - [ ] Среда - 0.33 л х2 - [ ] Фильтр 1 шт - [ ] Заварочники - [ ] Пакеты с вентиляцией - 4 - [ ] Соусники 15 шт - [ ] С собой - [ ] петри м - [ ] Семена - [ ] Банки - [ ] Вода - [ ] среда - [ ] Фильтр - [ ] Цефотаксим - [ ] Перекись 3% - [ ] Гипохлоран - [ ] Соусники - [ ] Планшет - [ ] Зип-пакеты - [ ] б пинцеты 2 - [ ] Шприцы - [ ] Процесс - [ ] остудить среду очень хорошо - [ ] Разводим антибиотик - [ ] Готовим гипохлорит 0.5% 20 мл / 110 мл + несколько капель твин 20 - [ ] Среда - [ ] Цефотаксим 1.65 мл (500 мг/л) **Через фильтр** - [ ] Разливаем по банкам - [ ] Стерилизация - [ ] Спирт 70% - 20 сек - [ ] Гипохлоран 0.5% - 8 мин - [ ] Перекись 3% - 1 мин - [ ] Промывка 3 раза - [ ] Высадка

Пунктов довольно много, и важно ничего не пропустить. Особенно больно уехать в лабу и забыть что-то важное дома. Поэтому я стараюсь тщательно следить за списком вещей, которые нужно взять с собой. Сколько времени занимают подобные эксперименты? Обычно я стартую

Климат для васаби Решил климат для васаби привести в порядок. Я его и раньше старался поддерживать, но разброс по температуре и влажности воздуха у меня был очень большой. Зимой бывало слишком сухо, а летом, в жаркие дни, слишком жарко. Мой мобильный кондиционер совсем не справлялся со своей работой (выкину его завтра нафиг), а ещё активно выдувал из помещения воздух, который я старался увлажнять. На съёмной квартире стены сверлить нельзя, поэтому поставил оконный кондей. Работает значительно эффективнее мобильного, хотя воздух тоже осушает, но не так сильно, как мобильный. Хочу держать на постоянке температуру воздуха 20-24°C и влажность 60-70%. На графике видно, что температура 7 августа стабилизировалась. Чуть позже влажностью займусь.

Рассада васаби А в подвале поспевает рассада из кусочков корневища. Подвал - очень комфортное по климату место для её разведения. Изначально хотел высадить её в новую коридорную установку, но теперь планирую отдать это место саженцам из in-vitro, которое надеюсь в ближайшие месяцы получить. Подвальные саженцы готов продать. Если есть желающие купить - пишите в личку. К сожалению, только Москва. Самовывоз или Яндексом. С дальними расстояниями пока не готов экспериментировать, высок шанс, что не доедут живыми.