علم النبات 🌽🌽🌽

Elke Hahn-Deinstorp: Applied Thin-Layer Chromatography. Best Practice and Avoidance of Mistakes. Wiley-VCH, Weinheim u. a. 2000, ISBN 3-527-29839-8

٤- مصدر لي الأحماض الامينية مثل الببتول أو التربتون ٥- مصدر لي الفيتامينات الثيماين ومثل مستخلص الخميرة  لابد من ضبط Ph المناسبة لي نمو البكتريا وضبط درجة الحرارة المثلى لي تحضينها يتم التزريع في ظروف تعقيم ثم تحضن لي الفترة المرغوبة في درجة الحرارة المثلى وبعد تمام فترة الحضانة تفصل المستعمرات البكتيريا من بيئة النمو بواسطة الطرد المركزي ( حوالي ٢٥٠ لفة rpm) وذالك بترسيبها على هيئة راسب ثم تجمع بعد ترسيبها على هيئة راسب في قاع الانبوبة    ٢- تحضير مستخلص الخلايا لي تحضير مستخلص الخلية لابد من فصل جدار الخلايا من البرتوبلازم و يمكن كسر جدار الخلية البكتيرية بي طرق عديدة منها الطرق الميكانيكية والطرق الكيميائية وهنا نستخدم الطرق الكيميائية لي كسر جدار الخلية البكتيرية وذالك بي استخدام انزيم lysozyme . يوجد اللعاب و بياض البيض والدموع وهو يسبب هضم جدار الخلية البكتريا المسئول وانزيم EDTA وهو ايثلين داي آمين تترا استيت و تستخدم في إزالة  ايوانات المغنزيوم اللازمة لحفظ  تركيب الجدار الخلوي  ثم يستخدم بعد ذالك مركب إضافي اسمه Deter gent و المنظم اسمه SDS واسمه صوديَم دودي سايل سولفيت تعمل على إزالة الدهون و يبقى فقط البروتين و الدنا والرنا وأهمها الدهون ويبقى من المستخلص البروتين والدنا والرنا تنقية دنا مستخلص الخلية يتكون مستخلص الخلايا من البروتين من الدنا والرنا لذالك لابد من التخلص أو إزالة البروتين والرنا حيث يتم التخلص من البروتين بالمزيب العضوي الفينول أو مخلوط الفينول و الملوروفور بي نسبة ١:١  وقد يستخدم قبل هذة المزيبات انزيم البروتيز و هو انزيم محلل لي البروتين يعمل الفينول أو المخلوط على ترسيب البروتين ويستخدم إضافة انزيم R nase هذا الانزيم يعمل على تحطيم الرنا وبالتالي نكون حصلنا على دنا نقي                    تركيز عينة الدنا الدنا المستخلص قد يكون مركزاً وفي بعض الحالات يحتاج إلى تركيز اي فصل الماء منه لي تركيز عينة الدنا يضاف إلى العينة الكحول الايثيلي المطلق (٪100)  و معه ملح طعام ثم توضع العينات في جهاز الطرد المركزي بي سرعة عالية لي فترة زمنية محددة يتم ترسيب الدنا في أسفل الأنبوب [٩/‏٨ ٩:٢٦ م] مشعل جمال: المحاضرة الثالثة                    الاختيار الكيفي يستخدم فيه تقانة التبريد الكهربي و القروس جيل AgrosGll           ناقلات الإكثار Glonung Veictor :- هي عبارة جزيئات دنا صغيرة و غالباً تتكون حلقية يضاف إليها الجين اغراه توطينه أو اكثارها و اما هذة الناقلات فهي اما ان تكون بكترية أو فيروسية أولاً البلازميدات البلازميد :- هي عبارة عن جزيئات دنا حلقية زائداً الحلزونة ملتفة حول نفسها و موجودة في أغلب أنواع البكتريا و ليست في جميع السلالات اغلب البلازميدات صغيرة الحجم حوالي 0.2 إلى 0.4 من حجم الكرومسوم البكتيري في أغلب حالات النمو فاءن البلازميدات غير ضرورية في الخلايا الموجودة بها كثير من البلازميدات تحتوي إلى جينات لها قيمة أو تأثير في بيئات خاصة عادة تكون هذة الجينات هي الدليل الرئيسي على وجود البلازميد مثال لذالك :- أن بعض البلازميدت (r) تجعل الخلايا البكتيرية الحاملة لها مقاومة لبعض المضادات الحيوية ولذلك في الطبيعة فاءن الخلية التي تحتوي على هذا النوع من البلازميدات تعيش أفضل في البيئات الموجودة بها حيوية في كثير من انواع البكتريا مكون البلازميدات مسؤولة  عن نقل الجينات بين الخلايا بطريقة معينة خاصة هذة الخاصية سببت بداية الاهتمام بالبلازميدات في خمسينيات القرن الماضي ١٩٥١ تماثل البلازميدات الفاجات ( الفيروسات) بصفة معينة بأنها معتمدة على نواتج التحول  الغزائي في خلية العائل اي ان البكتريا لكي تتكاثر تستخدم البلازميدات طبيعياً اغلب آليات التكاثر  بدنا الخلية البكترية بالإضافة الي ذالك بالإضافة إلى ذالك فهي هامة جداً لباحثي و علماء وراثة الميكروبات ولذلك لتكوين و تركيب و عمل الحالات ثنائية الأساس الكروموسومي الجزئية في الخلايا البكترية والإضافة إلى ذالك فهي هامة جداً في الهندسة الوراثية لأنها تستخدم بكثرة في الكثير من الأبحاث في الأحياء الجزيئية أو الميكروبية            انواع البلازميدات ثبت وجود عديد من طرق طرز أو أنواع إلبلازميدات في عديد من سلالات البكتيريا E coly ولكن الكم الأكبر من المعلومات تم التعرف عليها من ثلاثة طرز أو أنواع رئيسية تقريباً وهي :- ١- col.     ٢- R.     ٣- F وهي الكان تشترك في بعض الخواص و تختلف تماماً في أغلب الخواص وجود هذة البلازميدات في الخلية يتم التعرف عليه أساساً بها يأتي من الخواص :-

١- بلازميدات (f) وتسمى بلازميدات خلوية أو بلازميدات الجنس هذة البلازميدات و سبطه حيث تتوسط القابلية في نقل جينات الكرومسوم اي أنها تساعد في نقل جينات الكروموسوم من خلية بكترية تحتوي بلازميد f نفسه في خلية بكتيرية خالية منه ٢- بلازميدات (R) وهي بلازميدات مقاومة لي العقاقير وهذة البلازميدات تحمل خلايا العائل  (البكتريا) مقاومة لواحد أو أكثر من المضادات الحيوية كثير من بلازميدات R يمكنها تنتقل المقاومة إلى الخلايا الخالية من المضاد R ٣- بلازميدات (col) وهي بلازميدات منتجة colicnogenia plasmed تظل بلازميدات col البروتينات وتعرف هذة البلازميدات في مجموعة colicins وهي يمكنها أن تنتقل السلالات البكتيريا المضادة المقاربة لبعضها في النسب اي نفس الطراز والتي ينقصها بلازميد كول col آلية القتل تختلف باختلاف طرز أو أنواع البلازميد col طريقة التعرف على وجود البلازميدات [٩/‏٨ ٩:٢٧ م] مشعل جمال: المحاضرة الرابعة طريقة التعرف على وجود البلازميدات قد تحمل البلازميدات وهي عبارة دنا حلقي صغير قد يحمل جينات مقاومة لي المضادات الحيوية اي سلالة بكترية تحمل جين مقاوم لي المضاد الحيوي المعين فاءن هذة السلالة البكترية تكون غير حساسة أو لا تتأثر بإضافة هذا المضاد الحيوي في البيئة التي تنمو فيها وبهذه الطريقة يمكن التعرف على البلازميدات بالجينات التي تحملها والتي تكسب الكائن الدقيق التي توجد بداخله خصائص معينة        انزميات القطع والتحديد Restriction Anzymes هي عبارة عن انزميات عالية التخصص تقطع شريط دنا في تطابق محدد لي كل انزيم من هذه الانزيمات تتابعات تتعرف عليها ثم يقطع بعضها وقد تكون هذه التطابقات اما ٤ أو ٥ أو ٦ حسب التتابعات الخاصة بها (شريط دنا) وتقطع هذه الانزيمات بي نوعين من الانزيمات أولاً القطع المستوي مثال له AGG TT /CA GG T TGC AA/ GTCCAA القطع اللزج GT AG GA CA GT  GC GA TC CT GT CA CG اكتشاف انزميات القطع والتحديد تم اكتشاف هذه الانزيمات في السلالات البكترية والتي تطفل عليها الفيروسات وتفرز البكتريا هذه الانزيمات لي تحطيم و هضم الدنا و آنا الفيروسات التي بداخلها قبل أن تتضاعف الفيروسات داخل الخلية البكتيرية علماء الهندسة الوراثية استخلصو و سخروها لي لخدمة العلم والتقنيات الحديثة مثل تقنية توليف الدنا (Recom benet DNA) تسمية انزميات القطع والتحديد ( المشروط) تسمى هذه الانزيمات حسب اسم البكتريا المفرزة وتأخذ اسم السلالة البكتريا المفرزة لها إذا كانت السلالة البكتيريا تأخذ أكثر من انزيم فاءن الأسم يذهب برقم BDU دائماً الاسم الأول يكتب بي حرف كبير والاسم الثاني يكتب بي حرف صغير [٩/‏٨ ٩:٢٧ م] مشعل جمال:   المحاضرة الخامسة المكتبات الجينومية الجينوم هو المحتوى الجينى لكائن الحي هي المجموعات الجينة لكائنات الحية التي ساعدت في تكوين تطور الهندسة الوراثية هي عبارة عن  مركبات معلوماتية لحفظ قواعد البينات وهي تحتوي على جميع المعلومات لي جينات الكائنات الحية التي تم تحليلها والتعرف عليها وذالك للاستفادة منها في التقنيات الحيوية والهندسة الوراثية و تقنيات توليف الدنا احد تقنيات الهندسة الوراثية والتقانة الحيوية الهامة جداً لي التخصصات الحيوية المختلفة ( علم الحيوان النبات الإنسان الطبية الصيدلانية.... الخ) وأيضاِ تستخدم الان في مجال تشخيص الأمراض لأنها دقيقة جدآً مهما كان تركيز الطفيل في الجسم قليل تظهر نتائجها في الpcr لأن الجهاز يعتبر حساس ولذالك يمكن اكتشاف كثير من الأمراض قبل أن تصل مرحلة المضاعفات والعدوة [٩/‏٨ ٩:٢٧ م] مشعل جمال: المحاضرة السادسة       التعديل الوراثي في الجين هو إدخال جين أو جينات ذات خصائص محددة في تركيب المادة الوراثية في الكائن الحي Recompe nation     أهداف التحول الوراثي للنباتات ١- زيادة الإنتاجية ٢- تحسين أو زيادة القيمة الغزائية ٣- مقاومة الظروف البيئية مثل الجفاف والرطوبة والملوحة ودرجة الحرارة ٤- تحسين الشكل واللون والقوام والطعم ٥- مقاومة الآفات والأمراض مثل القطن المعدل وراثياً      أمثلة على النباتات المعدلة وراثياً ١- القن _ الذرة الشامية - الطماطم - الأرز - القمح مخاطر النبات المعدلة وراثياً تتلف التربة تقضي على الكائنات الدقيقة في التربة تقنيات البصمات

[٩/‏٨ ٩:٢٤ م] مشعل جمال: المحاضرة الأولى هندسة وراثية تعتبر الهندسة الوراثية والتقنية الحيوية بمثابة الثورة العلمية الرابعة بعد الثورة العلمية المرتبطة باستخدام البخار ثم الطاقة النووية ثم ثورة المعلومات ( الكمبيوتر) حيث أن العلم العربي لم يشارك مع الدول المتطورة في الثورات العلمية الثلاثة الأول فاءن لم يشارك مع الدول المتطورة ولم مسموحاً أن تفوقنا ثورة الهندسة الوراثة والدول التي. تمتلك العالم اذا أن الهندسة الوراثية والتقنية الحيوية ترتبط بشتاء نواحي العلم سواء الدوائي و الزراعي والطبي والهندسي أو البيئي و البيطري وبما يتحكم في غزاء و كساء وعلاج الإنسان و غيرها من المخلوقات يحتاج الإلمام بالهندسة الوراثة إلى خلية جيدة من علوم كثيرة منها الكيمياء والفيزياء والانزيمات وعلوم الكائنات الحية الدقيقة خاصة البكتيريا و الفيروسات والفطريات وأيضاً علوم الوراثية والخلية السيتولوجية و علوم النبات وكثرة من علم الزراعة والحيوان وعلوم الطب و خاصة فيسلوجيا الإنسان لذالك فاءن من الصعب تأليف مؤلف من الهندسة الوراثية          كيفية اختراق وإدخال الدنا إلى الخلية الحية بعد تكوين دنا معاد الصياغة لابد من إدخال إلى الخلية الحية و عادتاً تكون البكتريا أو تكون خلية الكائن الحي وعندما تنقسم هنة الخلية بسرعة وباعداد فلكية سوف يتم انقسام وتضاعف بإعداد كثيرة بنفس سرعة بسهولة ويسر وفي فترة زمنية قليلة وهذا لا يعتدي الاربع ايام على كثرة يتمكن دراسة العينات و تركيبها و تترتبها والتعبير الجيني ووظيفتها أيضاً المتميزة الثانية الإدخال الدنا المطعم داخل الخلايا الحية مثل البكتريا تعتبر طريق من تقنية الدنا المعاد سياغته المخلوط الناتج من التجارب إعادة صياغته تركيز  الدنا تحتوي بالإضافة إلى الدنا المعاد صياغته ١- حامل وسيط (أو ناقل) غير متحدد بجين المعاد الحاقك ٢- قطع سائبة حرة غير ملتحمة بالدنا ٣-جزيائيات ناقل وسيط مغلفة على تقسها في الشكل ٤- جزء دنا معاد صياغته يحمل الجزء المطلوب                     توطين الجين يعني نقله و توطينو داخل الكائن الحي ويمكن تلخيص فيما يلي ١- جزء من جزئي دنا هذا الجزء يحتوي على جين مطلوب عزله و نقله ويتم إدخال هذا الجين في جزئي دنا حلقي يسمى بالناقل الوسيط (veclor) وينتج عن ذالك كيميائياً جزء معاد صياغته Recombinent)(D N A) ٢-يعمل الناقل الوسيط كوحدة متحركة حيث ينقل الجين المطلوب نقله إلى الخلية العائلة البكتريا ولكن قد تكون عوائل أخرى مثل الخميرة يتكاثر الناقل الوسيط في داخل خلية العائلة منتجاً العديد من السلخ وبالتالي تنتج عديد من النسخ الحاملة للجين المرغوب ٣- عند تكاثر خلية العائل فاءنه ينتقل إلى النسخ جزء دنا معاد صياغته وبالتالي فاءنه انقسامات عديدة من الناقل الوسيط حدوثها ٤ - بعد العديد من انقسامات خليك العائل فإنه تكون مستعمرة وحدات متماثلة تماماً في كل خلية من المستعمرة تحتوي على على واخد أو العديد من نسخ جزءالدنا المعاد وبهذة الحالة فاءن الجين المطلوب يتم نقله بواسطة جزء الدنا المعاد الصياغة يطلق عليه الجين الموطن tobecolon   استخلاص  وتقنية دنا الخلية الحية [٩/‏٨ ٩:٢٦ م] مشعل جمال:  المحاضرة الثانية   تنقية وإستخلاص الدنا من الخلايا الحية يحتاج مهندس الوراثة الي تحضير دنا وذالك بستخلاصه وتنقيته من الخلايا الحية اولاَ يحتاج تحضير دنا الخلية الذي يحتوي على الجينات المطلوب توطينها ولذالك يستخلص هذا الدنا من خلية نبات او بكتريا أو حيوان أو انسان .. الخ ثم تدرس الجينات ثانياً تنقية البلازميدات من الخلية وذالك بفصل البلازميدات من الخلية البكترية وتعتبر خطوة تنقية البلازميدات من دنا الخلية الكلي ثالثاً احياناً يحتاج مهندس الوراثة الي تنقية الفاج والتي عادتاً تكون  بنزع الغلاف البروتيني ولكن احيانا يتم تنقية الفاج من خلايا البكتريا وهذا نادراً م يحدث وهذة الحالة نادرة مثل حالة m13 ذر الخيطان أو شريطين            تنقية دنا الخلية الكلي تحضر خلية الإنسان أو حيوان أو نبات أو كائن حي دقيق و طريقة الاستخلاص متشابه الا انه توجد اختلافات بسيطة استخلاص الدنا من الخلايا البكتيرية ١- تنمية البكتريا على بيئات خاصة ثم يتم فصلها عن البيئة و تجميعها  يمكن تنمية البكتريا على بيئات خاصة عديدة أهمها بيئة الاجار المغزي وهي بيئة شبه صلبة أو بيئة المرق المغزي وهي بيئة سائلة ويشترط أن تضاف لي البيئة المكونات التالية ١- مصدر لي الكربون مثل الجلوكوز أو السكروز ٢- مصدر لي الأوزون النيتروجين ٣- مصدر لي العناصر المعدنية الكالسيوم و البوتاسيوم والزنك

[٩/‏٨ ٩:٣٠ م] مشعل جمال: المحاضرة الثانية مستلزمات البحث العلمي ١- مركز لي البحوث 2- توفير المعامل والاجهزة ٣- توفير المكتبات ونشر البحوث ٤- توفير المال ٥- التفريغ التام للقائمين بالبحث العلمي المشرفين ٦- توفير الأماكن اللازمة ٧- الاهتمام بدراسات العلمية للجامعات        العناصر الأساسية التي يجب توافرها في البحث ١- الأمانة العلمية ٢- المثابرة والاجتهاد على العمل و تحمل المشاق ٣- الرغبة في القيام بالبحث العلمي ٤- التمييز في الاستقرارية وعدم التعضية خامساً :- الموهبة الصفات التي لابد أن يتمتع بها المشرف 1- أن يكون المشرف على دراية تامة علماً و ممارستاً بمنهجية البحث العلمي ٢- أن يكون موضوع البحث ضمن مجال و اهتمام المشرف ٣- أن يكون المشرف قدوة لي طالبه ٤- أن يكون لديه الوقت الكافي والقدرة على التواصل و العطاء ٤- متطلبات مراكز البحث العلمي ١- إنشاء معمل مركزي يتوفر به الأجهزة الأساسية المتقدمة لعمل بحوث ترقى لي النشر في المجلات العلمية العالمية ٢- توفير مكتبه حديثة بها المراجع والدوريات  وقواعد بينات حديثة حتى يستطيع الباحث مواكبة التطور العلمي ٣- الاهتمام بتدريس تكنولوجيا المعلومات ٤- الاهتمام باللغة الإنجليزية [٩/‏٨ ٩:٣٠ م] مشعل جمال: طرق بحث المحاضرة الأولى إذا حاولنا تحليل مصطلح البحث العلمي نجد أنه يتكون من كلمتين هو البحث والعلمي ويقصد بالبحث لقوياً التقصي عن حقيقة من الحقائق اما العلمي فهي كلمة تنسب إلى العلم والعلم معناهو المعرفة وإدراك الحقائق ووفقاً لهذا التحليل فاءن البحث العملي هو عملية تقصي منظمة فاتباع مناهج علمية محددة بغرض التأكد من صحتها أو تعديلها أو إضافة الجديد لها              طرق البحث العلمي طرق البحث العلمي عبارة عن المنهجية التي يستخدمها الباحث من أجل تتبع و تحليل. مشكلة علمية معينة و من إبراز ذالك الطرق م يلي المنهج الوصفي :- ويشيع استخدامه في الأبحاث النظرية غالباً و هو من أقدم طرق البحث العلمي وهو. هلامي ومطاط اي غير دقيق ذالك مثل وصف البيئة المحيطة و م يوجد فيها من ظواهر المنهج التجريبي :- ( التطبيقي) و يعتمد على التجارب العلمية و هو من أفضل طرق البحث العلمي التي تؤدي إلى الحصول على النتائج الواضحة و يشاع المنهج التطبيقي في العلوم الطبيعية مثل الكيمياء والفيزياء والأحياء .... إلخ المنهج الاستقرائي :- و يتم استخدامه في دراسة جزئية معينة من إحدى الظواهر و من ثم تعميم الناتج على باقي الأجزاء المنهج الاستنباطي :- وهو عكس المنهج الاستقرائي حيث يعتمد على التعرف علي المشكلة بي شكل عام ثم بعد ذالك يتم الانتقال لي التفاصيل الجزئية (اي م ينطبق على الكل ينطبق على الجزء) وعلى سبيل المثال أن الكهرباء عماد لي تأهيل جميع المصانع لي العمل و بناء عليه أن مصنع كابو لي الزبادي ينبقي أن يتم تشغيل الكهرباء به من أجل تعظيم الإنتاج والأرباح المنهج الفلسفي :- و يعتمد على الظن أو الاعتقاد بفكرة معينة والسعي بعد ذالك لي التيقن من صحتها ثم وضع نظرية ليها وذالك من خلال الملاحظات و التأمل و التحليل وفي الغالب. تتعلق بأمور عامة  مثل السعادة والعدالة والحرية والسلام أو الخير والشر المنهج التاريخي :- و يعتمد على مقارنة النتائج لي الأبحاث الماضية آو الأبحاث السابقة  بي نتائج الأبحاث الحاضرة ثم التنباء بالمستقبل المنهج المسحي :- و يتصف بالنظرة الشاملة لي جميع الأجزاء و من ثم إدراك الأفعال والتدخلات من خلال دراسة جميع أفراد المجتمع ومن امثلته المسح الاجتماعي لي التعرف على المعتقدات والأفكار والمسح المدرسي لي التعرف على المناهج و من ثم تطوير العملية التربوية العلمية [٩/‏٨ ٩:٣١ م] مشعل جمال: المحاضرة الثالثة خطة البحث Rebsearch proposal تعريف خطة البحث هي تقرير يكتبه الباحث بعد قيامه بالدراسات المسحية الأولية في مجال المشكلة التي اختار دراستها و يوضح فيه أهمية المشكلة و سبب اختيارها و ابعادها و حدودها واجراءاتها و فروضها بعد إعدادها تعرض على سمنار علمي يستفيد فيه الباحث من المناقشة العلمية من المتخصصين ثم تُعتمد الخطة أو ترفض أو تعدل لي تمثل وثيقة بين الباحث والمؤسسة التي تشرف على البحث تشتمل خطة البحث على الاتي ١- عنوان البحث the ritel وهو مؤشر يدل على مشكلة البحث  حيث يوضح مجال البحث ويجب أن يكون واضحاًَ و دقيقاً و سهلاً و ان يحتوي على الكلمات الأساسية لي البحث ويجب أن لا يكون طويلاً ولا قصيراً وان لا يتعدى٦٠ حرفاً أو ١٥ كلمة ٢- المقدمة introduction تحتوي المقدمة على الآتي:- أ- توضيح مجال المشكلة ب- توضيح أهمية الموضوع

ج- توضيح اسباب اختيار المشكلة د- توضيح الجهات المستفيدة من البحث ه- كتابة بعض الأبحاث السابقة في نفس المجال ٣- الأهداف  objectives وتشمل الأهداف التي من أجلها تمت كتابة البحث وتشمل نفس أسباب اختيار المشكلة وتوضيح أهمية الموضوع فقط بي شيء من التفصيل ٤- الطرق والأدوات والمقاييس التي استخدمها الباحث لي إثبات صحة الفروض Materia and Methods ٥- الخطة التي يضعها الباحث لي إكمال البحث Expenmental plan [٩/‏٨ ٩:٣١ م] مشعل جمال: ٦- النتائج المتوقعة Expected Results و يجب أن نكتب في هذه الفقرة م يأتي: يتوقع الحصول على نتائج قييمة و ثرة لي العينة التي يراد البحث عنها ٧- المراجع        Refrences             مراحل أو خطوات البحث العلمي    تمر عملية إعداد البحث العلمي بعدة مراحل متسلسلة وهذه المراحل وهي :- ١- مرحلة تحديد المشكلة أو اختيار الموضوع ٢- مرحلة حصر وجمع الوثائق العلمية المتعلقة بي الموضوع ٣- مرحلة القراءة ٤- مرحلة جمع وتخزين المعلومات ٥- مرحلة الصياغة والكتابة [٩/‏٨ ٩:٣٢ م] مشعل جمال:             مراحل أو خطوات البحث العلمي    تمر عملية إعداد البحث العلمي بعدة مراحل متسلسلة وهذه المراحل وهي :- ١- مرحلة تحديد المشكلة أو اختيار الموضوع ٢- مرحلة حصر وجمع الوثائق العلمية المتعلقة بي الموضوع ٣- مرحلة القراءة ٤- مرحلة جمع وتخزين المعلومات ٥- مرحلة الصياغة والكتابة كتابة البحث الهيكل العام لي أقسام البحث العلمي :-

مقدمة كرموتوغرافيا الفصل بالطبقة الرقيقة ([TLC]) هي تقنية تستخدم ل فصل مخاليط من المكونات. وذلك عن طريق: الطور الثابت: ويكون ذلك على لوح مغلف بطبقة رقيقة من المواد الممتزة على لوح من البلاستيك، أوالزجاج، أو رقائق الألومنيوم، وهي وعادة هلام السيليكا، أكسيد الألومنيوم، أو السليلوز (نشافة الورق). ومن المعروف هذه الطبقة من المواد الممتزة تعرف بالطور الثابت. ويستخدم الفصل اللوني لفصل خليط من المواد إلى مكوناتها. الطور المتحرك سائل معتمدة على الطور الثابت. والطور المتحرك يتدفق عبر الطور الثابت ويحمل مكونات الخليط معه. المكونات المختلفة تسافر بمعدلات مختلفة. وذلك عبر الطبقة الرقيقة المغلفة بهلام السيليكا أو الألومينا على قطعة من المعدن، الزجاج أو البلاستيك القوي. إعداد وتجهيز الواح الفصل (TLC) تجهيز الواح الطبقة الرقيقة (الوسط الثابت): ان المواد المدمصة في TLC هي نفسها المدمصة في كروماتوغرافيا الاعمدة. هذه الالواح تكون مصنوعة ومجهزة للاستخدام مباشرة. لوح TLC أو (Thin Layer Chromatography): من طرفها الخلفي موجود معدن الألمنيوم أو الحديد، ويتم تغطية هذه الطبقة أما بـ: أكسيد ألمنيوم- هو الوسط الساكن في التجربة (الألومينا) وأكسيد ألمنيوم ورمزه الكيميائي Al2O3، ويوضع على طبقة الألمنيوم مسحوق الالومينا وهو ليس له وظيفة في عملية الكروماتوغرافيا إلا انه يستعمل لكي تلتصق به الطبقة الأخرى. السيليكا. اختيار المذيب المناسب (الوسط المتحرك) يعتمد اختيار المذيب على نوع المادة المراد فصلها وقد يكون ضروريا اختيار عدد من المذيبات لاجراء عملية الفصل ويكون الاختيار التقريبي سهلا.فالمذيب الذي له قطبية عالية يؤدي إلى تحريك البقع مع جبهة المذيب، في حين ان المذيب غير القطبي لا يؤدي إلى تحريك البقع مع المذيب، ويعتبر الكلوروفورم والبنزين من المذيبات المتوسطة القطبية التي تستخدم بصورة واسعة لفصل العديد من المركبات. وضع العينة يتم وضع حجم معين في حدود 5-20 ميكرولتر من العينة التي تركيزها 0.1-5% بواسطة ماصة دقيقة أو محقن دقيق على خط نقطة البداة الذي بيعد 2 سم من أحد اضلاع اللوح. وينبغي الا يزيد قطر البقعة عن 1سم. وللمحافظة على بقاء البقعة صغيرة توضع العينة باحجام صغيرة عدة مرات مع التجفيف بعد كل إضافة. طرق تظهير البقع المفصولة (Visualization Method) طرق الفصل سهلة في حالة المواد المفصولة ملونة، الا انه في اغلب الحالات تكون المواد المفصولة عديمة اللون ويجب جعلها في هذه الحالة ملونة باستعمال بعض الكواشف، وتسمى هذه بكواشف التظهير. يعتبر اليود من أكثر كواشف التظهير استخداما حيث يتفاعل مع اغلب المواد العضوية معطيا متراكبات لها الوان اما بنية أو صفراء. وهناك طرق أخرى مثل تظهير هاليدات الالكيل برش لوح الطبقة الرقيقة بمحلول مخفف من نترات الفضة حيث تتكون هاليدات الفضة التي تتفكك بتأثير الضوء معطية بقع سوداء من رقائق الفضة على الطبقة الرقيقة. أيضا هناك استخدام مصباح الاشعة فوق البنفسجية وهي غالبا ما تظهر المركبات المفصولة على شكل بقع براقة ساطعة على الطبقة الرقيقة وبعضها يظهر عليه فقط خاصية التالق (Flourescence). وهناك أيضا إضافة مادة متالقة إلى الوسط الثابت في الطبقة الرقيقة مثل خليط من كبريتات الزنك والكادميوم. وإذا كانت المركبات المفصولة تسبب اخماد التالق (quenching flourescence) فانها ستظهر على هيئة بقع سوداء على الصفيحة عند تعرضها للاشعة فوق البنفسجية. تطور البقعة البنفسجية إلى بقعة حمراء وزرقاء منفصلة في لوح ال TLC. فروق TLC عن كروموتغرافيا العمود هنالك فروق متعددة ما بين طريقة الفصل "كروموتغرافيا العمود" وطريقة الفصل "كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة “ ومن بينها:

الفرق بين كروموتغرافيا العمودوكروموتغرافيا الطبقة الرقيقة كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة كروموتغرافيا العمود أما في كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة فلا نستطيع الحصول على المواد منفصلة لأنها تبقى على الورقة، أو بعبارة أخرى لا نستطيع استخلاص مواد من خلال كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة لكن في كروموتغرافيا العمود نستطيع الحصول عليها. في كروموتغرافية العمود نقوم بفصل المواد المكونة للخليط فعلياً ونستطيع في النهاية الحصول على كل مادة بشكل منفرد بالإضافة إلى انه في كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة نحصل على مواد الخليط بشكل أدق في كروموتغرافيا العمود اقل دقة (يحدث ذلك لقصر عمود الكروموتغرافيا، وكذلك لان عملية فصلنا للمواد محدودة بوقت قصير فلو انتظرنا يومان أو ثلاثة من الممكن أن نحصل على المواد بشكل أدق) نستطيع أن نستعمل ال [TLC] لان عملية الفصل بين المواد فيها أسرع أي بحاجة إلى وقت اقل في كروموتغرافيا العمودفنحتاج إلى وقت أكبر للفصل بين المواد. في كروموتغرافيا الطبقة الرقيقة [TLC] نقطة واحد من الخليط تكفينا لكي نفصل مركباته مما يجعلنا نوفر كمية الخليط المستخدمة في التجربة حيث أننا نستطيع استخدام الكمية المتبقية منه أما في كروماتغرافيا العمود فنحتاج إلى كمية كبيرة جدا مقارنة بال [TLC]. من كروموتغرافيا العمود، ففي 5 دقائق تقريبا حصلنا على مركبات الخليط وعرفنا مركباته (في كروموتغرافيا الـ [TLC])، أما في كروموتغرافيا العمود التقنية العملية عملية مشابهة لكروماتوغرافياالورق مع ميزةالسرعة، الفصل ألافضل، والاختيار بين مراحل مختلفة ثابتة. بسبب بساطته وسرعته غالبا ما تستخدم[TLC] لرصد تفاعل كيميائي وللتحليل النوعي لمنتجات التفاعل. الطريقة التحليليه نضع نقطة أو بقعة صغيرة من المحلول تحتوي على العينة على اللوح الرقيق، حوالي 1.5 سم من الحافة السفلى. والمذيب يسمح له بالتبخر التام، وإلا سوف يتحقق فصل سيئ للغاية أو لا يحدث فصل. إذا تم استخدام مذيب غير متطائر لاذابة العينة، لا بد من تجفيف لوح الفصل في الحاوية الفراغية. وهناك كمية من مذيب مناسب تمثل الطور المتحرك تسكب في كأس زجاجي أو أي حاوية شفافة مناسبة (غرفة الفصل) إلى عمق أقل من [1] سنتيمتر. يتم وضع شريط من ورق الترشيح (ويعرف أيضا باسم "الفتيل") في غرفةالفصل، بحيث تلامس القاع المذيب، وتمس جدار غرفة الفصل وتصل تقريبا إلى قمة الحاوية. يتم إغلاق الحاوية بغطاء من الزجاج أو أي غطاء آخر ويترك لبضع دقائق للسماح لأبخرة المذيبات تصعد ورقة الترشيح وتشبع الهواء في الغرفة. (عدم تشبع الغرفة سيؤدي إلى فصل ضعيف والنتائج غير قابلة للتكرار). ثم يتم وضع لوح في قاع TLC بحيث البقعة (ق) من العينة لا تلمس سطح الطور المتحرك في الغرفة، ويتم إغلاق الغطاء. والمذيب يتحرك صعودا اعلى اللوح بالخاصية الشعرية، ويجتمع خليط العينة ويحمل عنه لوحة (elutes العينة). عندما يصل المذيب القمة يجب إزالة اللوح لان (استمرار الشطف سوف تعطي نتيجة مضللة) والمجففة. الخطوة 1 الخطوة 1 الخطوة 2 الخطوة 2 الخطوة 3 الخطوة 3 الخطوة 4 الخطوة 4 الخطوة 5 الخطوة 5 الخطوة 6 الخطوة 6 الخطوة 7 الخطوة 7 عملية الفصل

Elke Hahn-Deinstorp: Applied Thin-Layer Chromatography. Best Practice and Avoidance of Mistakes. Wiley-VCH, Weinheim u. a. 2000, ISBN 3-527-29839-8

روابط مكونات مع طور ثابت من السلكا جل TLC المركبات الكيميائية المختلفة في العينة الخليط تهاجر بمعدلات مختلفة بسبب الاختلافات في الفتها نحو الطور الثابت، وبسبب الاختلافات في قابليتها للذوبان في المذيبات. عن طريق تغيير المذيبات، أو ربما باستخدام مزيج، وفصل مكونات يقاس R الفرعي القيمة يمكن تعديلها. أيضا، يمكن استخدام الفصل يتحقق مع لوحة TLC لتقدير انفصال فلاش اللوني معرض العمود ويستند الفصل بين المركبات على المنافسة من المذاب والطور المتحرك عن أماكن ملزمة لمرحلة ثابتة. على سبيل المثال، يمكن استخدام هلام السيليكا في المرحلة الطبيعية كمرحلة ثابتة ونظر فيه القطبية. نظرا الي الاختلاف في الاستقطاب، فالمركب ألاكثر قطبية يحتوي على تفاعل أقوى مع السيليكا، وبالتالي أكثر قدرة على تبديد الطور المتحرك من أماكنه. وبالتالي، فإن العنصر الأقل قطبية يتحرك على مستوى اعلى لوحة (مما أدى إلى ارتفاع قيمة تردد الراديو). إذا تغير الطور المتحرك إلى المذيبات القطبية أكثر أو خليط من المذيبات، فمن أكثر قدرة على تبديد المواد المذابة من الأماكن والمركبات ملزمة السيليكا كل شيء على لوحة TLC سوف تتحرك على مستوى اعلى لوحة. السائد القول ان "المذيبات القوية" (elutants) مركبات أكثر دفعا خلال لوح التحليل، في حين أن "المذيبات الضعيفة" elutants تتحرك بصعوبة بالغة. ترتيب القوة / الضعف يعتمد على طلاء (الطور الثابت) من لوحة TLC . لوحات هلام السيليكا TLC المغلفة، ويزيد من قوة elutant وفقا للترتيب التالي: فلوروكربون (أضعف)، الهكسين، بنتان، رابع كلوريد الكربون، البنزين / التولوين، ثنائي كلورو ميثان، ايثر، أسيتات الإيثيل، الأسيتونيتريل، الأسيتون، 2-بروبانول / N-بيوتانول، المياه، الميثانول، الترايثلامين، حمض الخليك، حمض الفورميك (أقوى). ل C18 لوحات مطلية النظام هو عكس ذلك. عمليا هذا يعني أنه إذا كنت تستخدم خليط من اسيتات والهكسان والطور المتحرك، مضيفا النتائج خلات الإيثيل أكثر في قيم أعلى الترددات اللاسلكية لجميع المركبات على لوحة TLC. تغيير قطبية الطور المتحرك وعادة لا يؤدي إلى عكس ذلك من تشغيل للمركبات على لوحة TLC . إن سلسلة eluotropic يمكن أن تستخدم كدليل في اختيار الطور المتحرك. إذا هو المطلوب من نظام تشغيل عكس من المركبات، يجب استخدام مرحلة عديم الأقطاب ثابتة، مثل C18-functionalized السيليكا. مثالا على ذلك اللوني من مستخرج من أوراق خضراء (على سبيل المثال السبانخ) في 7 مراحل التنمية. كاروتين أزل بسرعة ومرئيا فقط حتى الخطوة 2. الكلوروفيل A و B في منتصف الطريق في الخطوة الأخيرة وتين في تلطيخ أول مركب الصفراء المراجع Harry W. Lewis and Christopher J. Moody (13 يونيو 1989)، Experimental Organic Chemistry: Principles and Practice (ط. Illustrated)، WileyBlackwell، ص. 159–173، ISBN 978-0-632-02017-1، مؤرشف من الأصل في 19 مارس 2022. A.I. Vogel, A.R. Tatchell, B.S. Furnis, A.J. Hannaford, and P.W.G. Smith، Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry (ط. 5th)، ISBN 0-582-46236-3. Reich, E.; Schibli A. (2007)، High-performance thin-layer chromatography for the analysis of medicinal plants (ط. Illustrated)، New York: Thieme، ISBN 3-13-141601-7، مؤرشف من الأصل في 05 سبتمبر 2015. (PDF) https://web.archive.org/web/20180826222109/http://faculty.kfupm.edu.sa/chem/arfaj/CHEM-Teaching/Arabic-GeneralChem/PDF/Chromatography.pdf، مؤرشف من الأصل (PDF) في 26 أغسطس 2018. {{استشهاد ويب}}: الوسيط |title= غير موجود أو فارغ (مساعدة) This website is currently unavailable نسخة محفوظة 29 يوليو 2017 على موقع واي باك مشين. How to set up a TLC analysis نسخة محفوظة 25 نوفمبر 2017 على موقع واي باك مشين. Microsoft PowerPoint - Protein isolation chromatography نسخة محفوظة 31 ديسمبر 2010 على موقع واي باك مشين. انظر أيضًا كيمياء تحليلية استشراب استشراب غازي استشراب سائل عالي الأداء قائمة المراجع F. Geiss (1987): Fundamentals of thin layer chromatography planar chromatography, Heidelberg, Hüthig, ISBN 3-7785-0854-7 Jork, H., Funk, W., Fischer, W., Wimmer, H. (1990): Thin-Layer Chromatography: Reagents and Detection Methods, Volume 1a, VCH, Weinheim, ISBN 3-527-27883-4 Jork, H., Funk, W., Fischer, W., Wimmer, H. (1994): Thin-Layer Chromatography: Reagents and Detection Methods, Volume 1b, VCH, Weinheim Justus G. Kirchner (1978): Thin-layer chromatography, 2nd edition, Wiley Joseph Sherma, Bernard Fried (1991): Handbook of Thin-Layer Chromatography (= Chromatographic Science. Bd. 55). Marcel Dekker, New York NY, ISBN 0-8247-8335-2.